重視感染性疾病血清學(xué)檢測(cè) 加強(qiáng)性能驗(yàn)證及質(zhì)量控制

      近日，在第十一屆全國(guó)檢驗(yàn)?zāi)陼?huì)期間，衛(wèi)生部臨檢中心王露楠教授與來(lái)自全國(guó)檢驗(yàn)、感染領(lǐng)域近200位專家就“感染性疾病血清學(xué)檢測(cè)的性能驗(yàn)證及質(zhì)量控制”為主題進(jìn)行了深入探討與分享，四川大學(xué)華西醫(yī)院王蘭蘭教授擔(dān)任會(huì)議主席。
王露楠教授在報(bào)告中提出，近年來(lái)，實(shí)驗(yàn)室及檢驗(yàn)行業(yè)從業(yè)人員對(duì)檢測(cè)性能驗(yàn)證的認(rèn)可逐漸提高，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)依據(jù)性能評(píng)價(jià)的結(jié)果判斷，不僅僅關(guān)注呈現(xiàn)的指標(biāo)，須了解實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測(cè)系統(tǒng)、性能優(yōu)劣所在及檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告方式等。
      篩查試驗(yàn)和診斷試驗(yàn)的區(qū)別與應(yīng)用
王露楠教授表示，感染性疾病檢測(cè)的臨床應(yīng)用可以分為篩查試驗(yàn)、診斷試驗(yàn)、確認(rèn)試驗(yàn)和治療監(jiān)測(cè)四個(gè)方面。篩查試驗(yàn)是指用于篩查的定性試驗(yàn)必須具有高敏感性以確保感染的病原體被檢出；診斷實(shí)驗(yàn)是指用于臨床某種特定疾病或狀況是否存在的診斷；確認(rèn)試驗(yàn)是指用于驗(yàn)證篩查試驗(yàn)或者診斷試驗(yàn)結(jié)果的試驗(yàn)；治療監(jiān)測(cè)是指用于判定治療效果的檢測(cè)。
      對(duì)于如何界定篩查試驗(yàn)和診斷試驗(yàn)，王露楠教授表示，“在做術(shù)前感染性疾病篩查時(shí)，肯定是以篩查為目的，這時(shí)要求試劑具備高的靈敏度，但有可能特異性相對(duì)不是很高，因此可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。就診斷試劑而言，因受檢測(cè)人群不同，診斷試劑針對(duì)的是有可能感染人群，意味著感染可能性較高。因此，要樹(shù)立的觀念是，應(yīng)著重強(qiáng)調(diào)試劑的用途，檢測(cè)不同人群時(shí)應(yīng)明確性能指標(biāo)的關(guān)注點(diǎn)。”
性能驗(yàn)證的主要指標(biāo)介紹及應(yīng)用
      王露楠教授表示，實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)設(shè)備系統(tǒng)的熟悉程度及用于性能驗(yàn)證的樣本是性能驗(yàn)證的關(guān)鍵因素。性能驗(yàn)證的關(guān)鍵性能指標(biāo)包含精密度、分析靈敏度、臨床靈敏度、分析特異性和臨床特異性。關(guān)于精密度，由于待評(píng)價(jià)方法不同，影響濃度接近臨界值樣本檢測(cè)結(jié)果的精密度偏差來(lái)源也不相同；與定量檢測(cè)相似，定性檢測(cè)同樣應(yīng)考慮偏移（系統(tǒng)誤差）和不精密度（隨機(jī)誤差）。評(píng)價(jià)定性檢測(cè)試劑或系統(tǒng)精密度時(shí)，需采用濃度接近臨界值的分析物作為檢測(cè)材料，不宜采用陰性低值或陽(yáng)性樣本來(lái)評(píng)價(jià)定性檢測(cè)方法的不精密度。
針對(duì)分析靈敏度，王露楠教授指出，單次檢測(cè)沒(méi)有檢測(cè)出待測(cè)物，并不意味著分析靈敏度沒(méi)達(dá)到要求，單次檢測(cè)出待測(cè)物也不意味著達(dá)到要求。驗(yàn)證檢測(cè)下限通過(guò)系列稀釋，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)限以上和檢測(cè)限以下符合率存在變化，理想的分析靈敏度確認(rèn)曲線是通過(guò)軟件統(tǒng)計(jì)分析得出來(lái)，這是分析靈敏度檢測(cè)下限認(rèn)證的重要方法。同時(shí)，分析靈敏度驗(yàn)證是確定室內(nèi)質(zhì)控濃度的重要依據(jù)。經(jīng)常被混淆的概念是臨床靈敏度，是指試劑對(duì)疾病感染不同階段的樣本檢測(cè)能力。臨床靈敏度可通過(guò)對(duì)血清轉(zhuǎn)換盤(pán)的檢測(cè)能力來(lái)反應(yīng)，對(duì)早期樣本檢出能力而言，不同試劑表現(xiàn)差異比較大。
關(guān)于分析特異性，王露楠教授提出，交叉反應(yīng)和類風(fēng)濕因子是可能影響分析特異性的兩個(gè)因素。而人群和流行率則是影響臨床特異性的兩個(gè)因素。如待測(cè)人群陽(yáng)性率較低，得到陽(yáng)性結(jié)果的假陽(yáng)性可能性較高，所以要關(guān)注疾病的發(fā)病率。如疾病發(fā)病率高，新感染者增加，窗口期人數(shù)增加，應(yīng)選擇對(duì)血清轉(zhuǎn)換較敏感的方法，如抗原/抗體聯(lián)合檢測(cè)、核酸檢測(cè)等。當(dāng)疾病流行率上升時(shí)，人群中真陽(yáng)性數(shù)增加，為避免假陰性結(jié)果，應(yīng)選擇靈敏度高的試劑。所以，性能驗(yàn)證的結(jié)果是開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)控和制定結(jié)果報(bào)告流程的依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程簡(jiǎn)介和選擇
      王露楠教授在發(fā)言中指出，感染性疾病血清學(xué)檢測(cè)的流程選擇與確定，應(yīng)根據(jù)檢測(cè)目的來(lái)確認(rèn)。以梅毒為例，其檢測(cè)流程相對(duì)較復(fù)雜。美國(guó)和歐洲指南中關(guān)于梅毒檢測(cè)流程的推薦也不盡相同。根據(jù)目前的實(shí)際使用情況，美國(guó)的大型實(shí)驗(yàn)室和歐洲的主要實(shí)驗(yàn)室都逐漸采取了以梅毒特異性抗體檢測(cè)為初步實(shí)驗(yàn)，以梅毒非特異性抗體檢測(cè)為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)流程。當(dāng)然，在實(shí)際操作過(guò)程中，需根據(jù)最初的性能驗(yàn)證結(jié)果來(lái)制定符合各自實(shí)驗(yàn)室要求的檢測(cè)流程。如果以篩查為目的，建議選擇靈敏度較高的試劑作為起點(diǎn)，當(dāng)然這一過(guò)程中的假陽(yáng)性問(wèn)題不可忽視，建議陽(yáng)性樣本復(fù)檢。如果以診斷為目，特異性則需要非常好。可見(jiàn)，性能驗(yàn)證結(jié)果對(duì)于檢測(cè)流程的制定至關(guān)重要。
      在會(huì)議討論環(huán)節(jié)，針對(duì)發(fā)光法初檢梅毒呈陰性，初檢后即刻復(fù)檢TPPA呈陽(yáng)性，三個(gè)月后再次復(fù)檢TPPA呈陰性的樣本，王露楠教授表示，“免疫學(xué)檢測(cè)的影響因素是多方面的，例如炎性反應(yīng)會(huì)對(duì)TPPA檢測(cè)產(chǎn)生影響，應(yīng)考慮靜置樣本后再進(jìn)行檢測(cè)，所以推薦TPPA作為篩查以后的確認(rèn)檢測(cè)。”關(guān)于假陰性的問(wèn)題，王露楠教授表示，“此現(xiàn)象源于檢測(cè)試劑在生產(chǎn)過(guò)程中的抗原選擇及試劑的方法學(xué)，無(wú)論是發(fā)光法還是ELISA，都可能存在假陰性情況，之前講丙肝感染的復(fù)雜性，針對(duì)不同抗原檢測(cè)的抗體會(huì)有不同的情況，梅毒的檢測(cè)復(fù)雜性與丙肝類似，有一些特殊的抗原產(chǎn)生對(duì)應(yīng)抗體片斷很難檢出。就感染性疾病的檢測(cè)而言，不存在靈敏度100%的試劑，每種試劑都存有漏檢的可能，須盡可能使用靈敏度高的試劑。
就梅毒檢測(cè)這一問(wèn)題，王蘭蘭教授認(rèn)為：“實(shí)驗(yàn)室在做梅毒檢測(cè)時(shí)會(huì)遇到較多問(wèn)題，用ELISA方法檢測(cè)，結(jié)果在灰區(qū)時(shí)會(huì)帶來(lái)臨床糾紛，因此目前很多醫(yī)院使用發(fā)光法來(lái)檢測(cè)梅毒。作為檢驗(yàn)人員須了解所選擇的檢測(cè)方法學(xué)及試劑的性能優(yōu)勢(shì)所在，如臨床靈敏度、分析靈敏度等。”

綜上，本次會(huì)議王露楠教授對(duì)感染性疾病血清學(xué)檢測(cè)的性能驗(yàn)證及質(zhì)量控制進(jìn)行了介紹，建議針對(duì)不同檢測(cè)目的，將篩查試驗(yàn)和診斷試驗(yàn)區(qū)別應(yīng)用，尤其對(duì)性能驗(yàn)證的主要指標(biāo)及應(yīng)用、檢測(cè)流程介紹和選擇等方面進(jìn)行了細(xì)致詳實(shí)的闡述，各位專家積極參與會(huì)議討論羅氏診斷傳染檢測(cè)血清學(xué)標(biāo)志物的優(yōu)異性能，及其可為實(shí)驗(yàn)室醫(yī)生、臨床醫(yī)生、傳染病患者帶來(lái)的諸多獲益。醫(yī)脈通